La replicación del ADN comienza cuando la enzima desenrolla la hélice y rompe los puentes de hidrógeno que mantenían unidas a las dos cadenas del ADN. La enzima sintetiza a partir del punto de inicio, un corto segmento de ARN llamado . La principal enzima polimerizadora: la III no puede por si sola adicionar nucleótidos sino cuenta con un extremo 3´ libre de una cadena en crecimiento. El cebador ofrece un extremo 3´ libre para que la ADN polimerasa continúe la adición de nuevos desoxirribonucleótidos. La remueve al tramo de ARN cebador reemplazándolo por . Finalmente, una enzima llamada , establece puentes uniendo los tramos recién sintetizados. Durante la replicación, la cadena líder es sintetizada en forma contínua, mientras que la cadena rezagada crece discontinuamente.